HPLC voorbereiding op practicum

Voor al je opdrachten van school, werk of al het andere waar je niet uit kan komen, ook voor je lastige vraagstelling waar je niet uit kan komen.Zowel chemie als andere onderwerpen mogen hier behandeld worden.
Post Reply
User avatar
Reap
Argon
Posts: 681
Joined: 15 Sep 2011, 16:03
Chemistry interests: Inorganic
Location: Regio Eindhoven

HPLC voorbereiding op practicum

Post by Reap » 14 Nov 2011, 22:44

Ik moet mij voorbereiden voor een practicum op donderdag. Helaas is men denk ik vergeten de benodigde theorie op internet beschikbaar te stellen, dus moet ik zelf zoeken. We gaan de ascorbinezuur concentratie meten in spinazie.

HPLC = High Performance Liquid Chromatography.
Ik weet dat je sample met een oplosmiddel (eluens?) door een kolom geperst wordt en dat je sample in fracties het einde van de kolom (detector) bereikt (retentietijden).
Maar wat ik nu niet begrijp is op basis waarvan de fracties gescheiden worden. intermoleculaire interactie in de kolom/viscositeit?

Ook moet ik een aantal voorbereidende vragen beantwoorden, waarin om dingen gevraagd worden waar ik nog nooit van gehoord heb. (de schotels bijvoorbeeld)

Vragen ter voorbereiding:
1. Hoe bereken je het aantal schotels en de resolutiefactor?
2. Wat is de structuurformule van Vitamine C, waarom is dit een zuur?
3. Teken een schema van een HPLC en noem de onderdelen.
4. Welke 2 soorten detectoren zijn geschikt om Vitamine C te bepalen en waarom?
5. Welke kolom wordt er gebruikt? Verklaar deze?
6. Is Vitamine C een polair of apolaire stof (verklaar)?

Opdrachten:
1. Bereken het aantal schotels van de gebruikte kolom.
2. Neem het UV-absorptiespectrum (met UV-VIS) op van Vitamine C en bepaal de golflengte die je bij de detector van de HPLC moet instellen.
3. Bereken de resolutie factor van 2 aanwezige pieken in het chromatogram.
4. Bepaal het Vitamine C gehalte in spinazie m.b.v. HPLC



1. Geen idee
2. Image
Het "vrije" elektronenpaar dat een proton gebruikt van een O dat aan een aromatische ring hangt, gaat graag in het gedelokaliseerd elektronen systeem meedoen en laat dus dat proton los, waardoor het molecuul als een zuur beschouwd dan worden.
3. Al een gevonden, is niet zo ingewikkeld (alleen die schakelaar)
4. UV-vis wordt gebruikt bij aspirine, ik denk ook bij deze analyse (geen idee waarom)
5. Ik weet dat er kolommen zijn met verschillende C waardes (hoe hoger deze waarde hoe meer interactie met apolaire deeltjes)
6. Ik vind ascorbinezuur er vrij apolair uit zien: veel elektronegatieve zuurstofjes, maar vrij gelijkmatig verdeeld.

Het komt er op neer dat ik mezelf in een situatie bevind waarin ik niet weet waarmee ik moet beginnen.
Het zou fijn zijn als iemand een artikel weet dat ik even door moet lezen om in de goede richting gestuurd te worden zou fijn zijn.

User avatar
Wouter
Krypton
Posts: 1982
Joined: 02 Aug 2008, 01:47
Chemistry interests: Organic
Location: Groesbeek, Gelderland
Contact:

Re: HPLC voorbereiding op practicum

Post by Wouter » 15 Nov 2011, 10:46

Je monster wordt vooral gescheiden op basis van interactie met het kolommateriaal, maar ook op basis van oplosbaarheid in dit milieu. Het is sowieso intermoleculair.

Er is een formule om het aantal schotels te berekenen. Hoe is ascorbinezuur apolair? Ik zie vier alcoholen (waarvan één flink zuur) en een lacton. Heel veel polairder krijg je je verbindingen niet. Hoe groter het elektronegativiteitsverschil (?), hoe polairder de verbinding doorgaans is. Zuurstof-waterstof bindingen hebben het grote voordeel ook nog eens waterstofbruggen te kunnen vormen.
Organisch chemicus

User avatar
Reap
Argon
Posts: 681
Joined: 15 Sep 2011, 16:03
Chemistry interests: Inorganic
Location: Regio Eindhoven

Re: HPLC voorbereiding op practicum

Post by Reap » 15 Nov 2011, 13:04

Ja misschien heeft de ladingsverdeeldheid wel met dipolen te maken.
Ik dacht als het allemaal netjes verspreid is over het molecuul can is het niet zo polair, maar het molecuul blijft natuurlijk zelf een behoorlijk elektronegatieve buitenrand houden.

User avatar
Wouter
Krypton
Posts: 1982
Joined: 02 Aug 2008, 01:47
Chemistry interests: Organic
Location: Groesbeek, Gelderland
Contact:

Re: HPLC voorbereiding op practicum

Post by Wouter » 15 Nov 2011, 22:10

Suiker is ook megapolair.
Organisch chemicus

Post Reply

Who is online

Users browsing this forum: No registered users and 2 guests